नीता अंबानी का जन्म 1 नवंबर 1963 को मुंबई के एक मध्यमवर्गीय परिवार में हुआ, जहाँ उनके पिता बिड़ला कंपनी में उच्चाधिकारी थे। हालाँकि वे शुरू से ही भरतनाट्यम नृत्य का कैरियर बनाना चाहती थीं और माँ उन्हें चार्टर्ड अकाउंटेंट बनाना चाहती थीं, उन्होंने नरसी मोंजी कॉलेज से शिक्षा प्राप्त की और प्रशिक्षित भरतनाट्यम नृत्यांगना बन गईं।

शिक्षा के प्रति अपने गहरे लगाव के चलते उन्होंने ग्रामीण बच्चों के लिए स्कूल शुरू किए और जून 2003 में मुंबई के प्रतिष्ठित धीरूभाई अंबानी इंटरनेशनल स्कूल की स्थापना की, जो भारत के केवल 37 चुनिंदा स्कूलों में से एक है जहाँ 'इंटरनेशनल बैकलॉरेट' कार्यक्रम उपलब्ध है। वर्तमान में वे धीरूभाई अंबानी फाउंडेशन की मुखिया हैं और रिलायंस इंडस्ट्रीज के सामाजिक-धार्मिक कार्यों के साथ-साथ UNAIDS के एड्स पहल में भी सक्रिय भूमिका निभाती हैं।

समाज सेवा में उनके उत्कृष्ट योगदान के लिए उन्हें 2005 में 'समाज सेवा विश्व भूषण' तथा 2012 में AIMA द्वारा 'कॉर्पोरेट सिटीजन ऑफ द ईयर' पुरस्कार से सम्मानित किया जा चुका है।